人外周血單個(gè)核細(xì)胞 Human PBMC

外周血單個(gè)核細(xì)胞（Peripheral blood mononuclear cell，PBMC）是指外周血中具有單個(gè)細(xì)胞核的細(xì)胞，包括淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞等。

提取方法：
全血樣本聚蔗糖-泛影葡胺（Ficoll-Hypaque）密度梯度離心分離

其他種屬PBMC

猴外周血單個(gè)核細(xì)胞 Monkey PBMC

大鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞 Rat PBMC

小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞 Mouse PBMC

比格犬外周血單個(gè)核細(xì)胞 Dog PBMC

豬外周血單個(gè)核細(xì)胞 Minipig PBMC

兔外周血單個(gè)核細(xì)胞 Rabbit PBMC

外周血單個(gè)核細(xì)胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC），是指外周血中具有單個(gè)核的細(xì)胞，包括淋巴細(xì)胞（Lymphocyte）、單核細(xì)胞（Monocyte）、樹突狀細(xì)胞（DC）和其他少量細(xì)胞。PBMC可利用健康人或動(dòng)物供體的外周血，通過Ficoll密度梯度離心，磁珠分選等步驟獲得，主要包括淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞。

Ficoll是蔗糖的多聚體，中性，平均分子量400,000，當(dāng)密度為1.2g/mL，未超出正常生理性滲透壓，也不穿過生物膜。紅細(xì)胞、粒細(xì)胞比重大，離心后沉于管底；淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的比重小于或等于分層液比重，離心后漂浮于分層液的液面上，也可有少部分細(xì)胞懸浮在分層液中。吸取分層液液面的細(xì)胞，就可從外周血中分離到單個(gè)核細(xì)胞。

人外周血單個(gè)核細(xì)胞 Human PBMC

不同細(xì)胞類型的比例
PBMC中大部分都是淋巴細(xì)胞，包括B細(xì)胞和T細(xì)胞，其中CD3 T細(xì)胞又占了淋巴細(xì)胞中絕大部分(45-70%)。這些T細(xì)胞都處于初始（naive）狀態(tài)，即已經(jīng)成熟了但沒有受到抗原刺激。 在正常人中，只有非常小的一部分初始T細(xì)胞會(huì)因抗原識(shí)別而被激活。同樣的B細(xì)胞也都處于初始狀態(tài)。相對(duì)于淋巴細(xì)胞，單核細(xì)胞的比例在10-30%，收到刺激之后會(huì)發(fā)育成樹突狀細(xì)胞(DC)或巨噬細(xì)胞。干細(xì)胞的比例非常低，只有0.1-0.2%，因此很難從全血樣本中分離到。

細(xì)胞運(yùn)輸與保存
（1）干冰運(yùn)輸，收到細(xì)胞后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇；
（2）T25瓶運(yùn)輸細(xì)胞，收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)，傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，再進(jìn)行凍存，具體操作步驟見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

PBMC收到后注意事項(xiàng)：
（1）收到PBMC細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)反饋。
（2）先不打開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放培養(yǎng)箱靜置四小時(shí)，穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，切忌在溫箱內(nèi)靜置過夜。
（3）靜置后鏡檢，拍照，記錄細(xì)胞狀態(tài)。建議傳代后也拍照記錄細(xì)胞生長(zhǎng)情況。
（4）貼壁細(xì)胞：若細(xì)胞密度超過80%，可正常傳代；若未超過80%，收集細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，留8ml繼續(xù)培養(yǎng)至80%左右再傳代，瓶蓋可稍微擰松。
（5）細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基含血清和雙抗，可收集后4℃保存?zhèn)溆?，可補(bǔ)加2%血清。剛開始傳代時(shí)建議一半用細(xì)胞瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基，一半用自備的培養(yǎng)基，使細(xì)胞逐漸適應(yīng)培養(yǎng)條件，以免因不適應(yīng)而造成生長(zhǎng)狀態(tài)不佳。
（6）細(xì)胞胰酶消化液建議使用PBS配制。